በመጀመሪያ ሁለቱም EcoR1 እና Xba1 ዲኤንኤን ሲፈጩ (እንደ Nde1) 5' ተንጠልጥለው ይተዋሉ። በሁለቱም ሁኔታዎች የ 3' ጫፍ ተዘግቷል ለዚህም ነው ፖሊመርሜዝ መሰረቶችን መጨመር የሚችለው. በሁለተኛ ደረጃ ሁሉም ፖሊመሬሴዎች መሰረቶችን ወደ 3' ጫፍ ብቻ ነው ማከል የሚችሉት፣ ስለዚህ Klenow 4 ቤዝ ወደ ተመለሰው የሁለቱም ጣቢያዎች መጨረሻ 3' ጫፍ ያክላል።
የመገደብ ኢንዛይሞች 5 ፎስፌት ይተዋል?
በገደብ ኢንዛይሞች የተፈጨው ቬክተሮች እና ማስገባቶች አስፈላጊውን የተርሚናል ማሻሻያ (5' ፎስፌት እና 3' ሃይድሮክሳይል) ይዘዋል፣ በPolymerase Chain Reaction (PCR) የተፈጠሩ ቁርጥራጮች ግን ላይኖራቸው ይችላል።
የማለፊያ ጫፎች ሊጣመሩ ይችላሉ?
Blunt-end ligation
Blunt-end ligation የወጡትን ጫፎች መሰረት ማጣመርን አያካትትም፣ስለዚህ ማንኛውንም ጠፍጣፋ ጫፍ ወደሌላ ደማቅ መጨረሻ ሊጣመር ይችላል። እንደ SmaI እና EcoRV ባሉ ገደቦች ኢንዛይሞች ሊፈጠሩ ይችላሉ።
Taq ፖሊመሬሴ ጠፍጣፋ ጫፎችን ይፈጥራል?
አዎ… Taq Polymerase በ PCR ላይ የመጨረሻውን የማራዘሚያ ደረጃ በ72 ዲሲሲ ካስቀመጡ A-overhangን ይጨምራል። በብዛት ለTA ክሎኒንግ ጥቅም ላይ ይውላል።
ለምንድነው የKlenow ቁርጥራጭን በዲኤንኤ ቅደም ተከተል ይጠቀሙ?
የKlenow ቁርጥራጭ በጥናት ላይ ለተመሰረቱ ተግባራት እንደ፡ ከነጠላ ገመድ አብነቶች የተገኘ ድርብ-ክር ያለው ዲኤንኤ ውህደት ። የቀዘፈ 3' ጫፍ የዲኤንኤ ቁራጮችን በመሙላት 5' በላይ የተንጠለጠለ ። የምግብ መፈጨት 3' በላይ ማንጠልጠያ።
