የሞለኪውላው ክብደት በትልቁ፣የመጠቅለያው ርዝመት ይረዝማል እና ሞለኪውሉ ቀርፋፋ ይሄዳል። ስለዚህ electrophoresis + SDS የሚለየው በሞለኪውላዊ ክብደት መሰረት እንጂ በአገርኛ ክፍያ አይደለም። ጠቃሚ ማሳሰቢያ፡ ተመሳሳይ ርዝመት ያላቸው ፕሮቲኖች አብዛኛውን ጊዜ በጄል ኤሌክትሮፊዮሬሲስ + ኤስዲኤስ ሊለዩ አይችሉም።
ተመሳሳይ ሞለኪውላዊ ክብደት ያላቸውን ፕሮቲኖች እንዴት ይለያሉ?
ሴንትሪፍጌሽን፣ኤሌክትሮፎረሲስ እና ክሮማቶግራፊ ፕሮቲኖችን የማጥራት እና የመተንተን በጣም የተለመዱ ቴክኒኮች ናቸው። ሴንትሪፉግሽን ፕሮቲኖችን የሚለያየው በደለል ፍጥነታቸው መሰረት ሲሆን ይህም በጅምላ እና ቅርጻቸው ላይ ተጽእኖ ይኖረዋል።
የትኞቹ ቴክኒኮች ፕሮቲኖችን በክፍያ የሚለያዩት?
ፕሮቲኖች በተጣራ ክፍያቸው በion-exchange chromatography ሊለያዩ ይችላሉ። አንድ ፕሮቲን በፒኤች 7 የተጣራ አዎንታዊ ክፍያ ካለው፣ ብዙውን ጊዜ ካርቦሃይድሬትስ ቡድኖችን ከያዙ ዶቃዎች አምድ ጋር ይጣመራል፣ በአንፃሩ ግን አሉታዊ ቻርጅ የተደረገ ፕሮቲን አይሆንም (ምስል 4.4)።
ከሚከተሉት ቴክኒኮች ውስጥ የትኛው በሞለኪውል ክብደት ላይ በመመስረት ፕሮቲኖችን ለመለየት በጣም ተስማሚ የሆነው የትኛው ነው?
ክሮማቶግራፊ በክፍልፋይ ላይ የተመሰረቱ ዘዴዎች በመለያየት ላይ በጣም ውጤታማ ናቸው ፣ እና ትናንሽ ሞለኪውሎችን እንደ አሚኖ አሲዶች ፣ካርቦሃይድሬትስ እና ፋቲ አሲድ መለየት። ነገር ግን አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ (ማለትም ion-exchange chromatography) ማክሮ ሞለኪውሎችን እንደ ኒውክሊክ አሲዶች እና ፕሮቲኖች በመለየት ረገድ የበለጠ ውጤታማ ናቸው።
የትኛው የአምድ አይነትክሮማቶግራፊ በሞለኪውላዊ ክብደት መሰረት ፕሮቲኖችን ይለያል?
Gel filtration (GF) ክሮማቶግራፊ ፕሮቲኖችን በሞለኪውላዊ መጠን ብቻ ይለያል። መለያየት የሚከናወነው ባለ ቀዳዳ ማትሪክስ በመጠቀም ሞለኪውሎቹ በተጨባጭ ምክንያቶች የተለያዩ የመዳረሻ ደረጃዎች አላቸው - ማለትም ትናንሽ ሞለኪውሎች የበለጠ ተደራሽነት አላቸው እና ትላልቅ ሞለኪውሎች ከማትሪክስ ውስጥ የተገለሉ ናቸው።
